人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒原理

本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗人 IL-18BP 單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 IL-18BP與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗人IL-18BP，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，zui后加終止液硫酸，在450nm處測(cè)OD值，IL-18BP濃度與OD值成正比，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中IL-18BP濃度。

試劑盒組成（2-8℃保存）

人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒準(zhǔn)備試劑與收集血樣

1.          收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)，2-8℃保存48小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復(fù)凍融。血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清至少作1：5稀釋?zhuān)ㄈ?0ul，加標(biāo)本稀釋液200ul,稀釋5倍）。

2.          標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入1ml蒸餾水混勻，配成4000pg/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管，每管加入標(biāo)本稀釋液300ul。在*管中加入4000pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul，移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋?zhuān)瑥牡谄吖苤形?00ul棄去。第八管為空白對(duì)照。

3.          10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。

4.         洗滌液：用重蒸水1:20稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）

人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒檢測(cè)程序

1.          加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。

2.          洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。

3.          每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。

4.          洗板：同前。

5.          每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。

6.          洗板：同前。

7.          每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應(yīng)15分鐘。

8.          每孔加入100ul終止液混勻。

9.          30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。

結(jié)果計(jì)算與判斷

1.          所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。

2.          以標(biāo)準(zhǔn)品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0 pg/ml為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.          根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)IL-18BP含量，再乘上稀釋倍數(shù)即可。

人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒性能

             1.   靈敏度：zui小的IL-18BP 檢測(cè)濃度小于15pg/ml。

2.        特異性：可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人IL-18BP。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。

3.        重復(fù)性：板內(nèi)、板見(jiàn)變異系數(shù)均小于10.2％。

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