軟瓊脂法

軟瓊脂法

0.6% media-agar混合層底部。

使0.6%瓊脂混合下列組件（這使得200毫升）：

二甲醚100毫升

如果20毫升

筆/ 2毫升ddh2o鏈球菌

28毫升

?溫暖組件37°丙

?添加12.4克瓊脂100毫升ddh2o和微波消融（不要在微波或您將失去太多卷）。微波只是足夠長(zhǎng)的*融化的瓊脂。

?加入50毫升瓊脂的prewarmed混合物，你就準(zhǔn)備。

?渦流混合避免氣泡。

?加入4毫升混合每6平方厘米板

?允許*冷靜而你準(zhǔn)備你的細(xì)胞。

準(zhǔn)備上面層混合所有列出的成分除瓊脂。

您將需要一個(gè)50毫升錐形的每一個(gè)細(xì)胞系，你測(cè)試。準(zhǔn)備下列組合和地方（）在37攝氏°pre。

組合：

?2二甲醚12.5毫升

?中頻2.5毫升

?筆/鏈球菌0.25毫升

?ddh2o 3.5毫升

標(biāo)簽管。每個(gè)細(xì)胞系應(yīng)該有3 - 15毫升錐形管標(biāo)記105，104，或103，這些都應(yīng)該有在管細(xì)胞。

提升細(xì)胞系，通過(guò)一個(gè)100μ細(xì)胞過(guò)濾器。

細(xì)胞計(jì)數(shù)。

懸浮細(xì)胞在1×105個(gè)/毫升（5毫升）。

設(shè)立稀釋如下：

添加1毫升的珊瑚和1毫升的1×105個(gè)/毫升稀釋到105管。

加入9.5毫升和500μ玩家從1×105個(gè)/毫升到104管和混合反相（你不做這個(gè)管-見下文）。

加入1.9毫升的珊瑚和100μ升104管103管。將2.9毫升管從104（這應(yīng)該留給你共7毫升）

現(xiàn)在融化2.4%瓊脂諾貝爾已準(zhǔn)備在ddh2o（你這一較早的時(shí)候你到底層）。

加入6.2毫升的諾貝爾一個(gè)50毫升錐形管和混合的幾倍。

檢查以確保該管的內(nèi)容不夠酷（你能碰到你的手腕，它應(yīng)該是舒適的溫暖。

現(xiàn)在你需要工作速度快，但避免氣泡！！！！！！

添加以下的瓊脂/媒體組合，每個(gè)管：

添加2毫升的103和105管

添加7毫升到103管。

由翻轉(zhuǎn)幾次。

板4毫升混合在每個(gè)相應(yīng)的板。

允許板坐30到60分鐘，直到他們是鞏固和再仔細(xì)地把他們轉(zhuǎn)移到孵化器。

回到步驟4個(gè)細(xì)胞系。

長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)你可以養(yǎng)活如果他們正在干或黃色與0.3%瓊脂混合