ELISA法測(cè)定單克隆抗體的效價(jià)

ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。免疫酶技術(shù)是將酶標(biāo)記在抗體/抗原分子上，形成酶標(biāo)抗體/酶標(biāo)抗原，稱為酶結(jié)合物。該酶結(jié)合物的酶在免疫反應(yīng)后，作用于底物使之呈色，根據(jù)顏色的有無(wú)和深淺，定位或定量抗原/抗體。

 

ELISA法是免疫酶技術(shù)的一種，其特點(diǎn)是利用聚苯乙烯微量反應(yīng)板(或球)吸附抗原/抗體，使之固相化，免疫反應(yīng)和酶促反應(yīng)都在其中進(jìn)行。在每次反應(yīng)后都要反復(fù)洗滌，這既保證了反應(yīng)的定量關(guān)系，也避免了末反應(yīng)的游離抗體/抗原的分離步驟。在ELISA法中，酶促反應(yīng)只進(jìn)行一次，而抗原、抗體的免疫反應(yīng)可進(jìn)行一次或數(shù)次，即可用二抗(抗抗體)、三抗再次進(jìn)行免疫反應(yīng)。

 

目前常用的幾種ELISA方法有：測(cè)定抗體的間接法，測(cè)定抗原的雙抗體夾心法和測(cè)定抗原的競(jìng)爭(zhēng)法等。本實(shí)驗(yàn)采用間接法測(cè)定單克隆抗體效價(jià)。其主要過(guò)程為：首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應(yīng)板的凹孔內(nèi)，加待測(cè)抗體，保溫后洗滌以除去未結(jié)合的雜蛋白質(zhì)，加酶標(biāo)抗抗體，保溫后洗滌，加底物保溫30分鐘后，加酸或堿終止酶促反應(yīng)，用目測(cè)或光電比色測(cè)定抗體含量。

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