豬瘟抗體ELISA實(shí)驗(yàn)操作要領(lǐng)

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)的趙老師于去年12月在我公司代測(cè)豬瘟抗體，白介素，干擾素等相關(guān)系列21個(gè)指標(biāo)的ELISA實(shí)驗(yàn)：現(xiàn)需發(fā)表文獻(xiàn)特我公司關(guān)于豬瘟抗體等實(shí)驗(yàn)的詳細(xì)操作流程，我司技術(shù)做出如下詳細(xì)解答：

1．用包被液將豬瘟弱毒單抗純化酶聯(lián)抗原、豬瘟強(qiáng)毒單抗純化酶聯(lián)抗原各做100倍稀釋，每孔包被100μl，4℃濕盒放置一夜。
2．次日取出，甩去孔內(nèi)液體，3×3′沖洗。
3．將待檢血清以PBS液做400倍稀釋，每孔加100μl同時(shí)將豬瘟陽(yáng)性血清、豬瘟陰性血清各做100倍稀釋，于對(duì)照孔中加100μl。37℃溫育1.5h～2h。
4．重復(fù)第二步，取出，甩去孔內(nèi)液體，3×3′洗滌。
5．將兔抗豬IgG酶標(biāo)抗體以PBS液做100倍稀釋，每孔加100μl，37℃溫育1.5h～2h。
6．重復(fù)第4步。
7．每孔加底物溶液100μl，室溫下觀察顯色反應(yīng)。當(dāng)陰性對(duì)照孔稍顯色時(shí)，立即終止反應(yīng)，并以陰性孔做空白對(duì)照。
8．每孔加終止液50μl立即于酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)儀測(cè)定490nm波長(zhǎng)的光密度。
（三）結(jié)果判定
在豬瘟弱毒酶聯(lián)板上，OD≥0.2，為豬瘟弱毒抗體陽(yáng)性；OD＜0.2，為豬瘟弱毒抗體陰性。
在豬瘟強(qiáng)毒酶聯(lián)板上，OD≥0.5，為豬瘟強(qiáng)毒抗體陽(yáng)性；OD＜0.2，為豬瘟強(qiáng)毒抗體陰性。