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葉綠素的實驗操作步驟具體介紹

  • 發布日期:2014-07-28      瀏覽次數:6833
    • 葉綠素上市以來,由于試劑的穩定性,特異性一直是我司銷售的試劑,上海恒遠生物科技有限公司代理葉綠素多年,產品質量及服務一直深受老師同學們的厚愛。
      葉綠素是一種二羧酸—葉綠酸與甲醇和葉綠醇形成的復雜酯,故可與堿起皂化反應而生成醇(甲醇和葉綠醇)和葉綠酸的鹽,產生的鹽能溶于水中,可用此法將葉綠素與類胡蘿卜素分開;葉綠素與類胡蘿卜素都具有光學活性,表現出一定的吸收光譜,可用分光鏡檢查或用分光光度計測定;葉綠素吸收光量子而轉變成激發態,激發態的葉綠素分子很不穩定,當它變回到基態時可發射出紅光量子,因而產生熒光。葉綠素的化學性質很不穩定,容易受強光的破壞,特別是當葉綠素與蛋白質分離以后,破壞更快,而類胡蘿卜素則較穩定。葉綠素中的鎂可以被H 所取代而成褐色的去鎂葉綠素,后者遇銅則成為綠色的銅代葉綠素,銅代葉綠素很穩定,在光下不易破壞,故常用此法制作綠色多汁植物的浸漬標本。

      實驗步驟
      1. 光對葉綠素的破壞作用
         1)取4支小試管,其中兩支各加入5ml用水研磨的葉片勻漿。另外兩支各加入2.5ml葉綠體色素乙醇提取液,并用95%乙醇稀釋1倍。
         2)取1支裝有葉綠素乙醇提取液的試管和1支裝有水研磨葉片均漿的試管,放在直射光下,另外兩支放到暗處,40min后對比觀察顏色有何變化,解釋其原因。
      2. 熒光現象的觀察
      取1支20ml刻度試管加入5ml濃的葉綠體色素乙醇提取液,在直射光下觀察溶液的透射光與反射光顏色有何不同。
      3. 皂化作用(綠色素與黃色素的分離)
         1)在做過熒光現象觀察的葉綠體色素乙醇提取液試管中加入1.5ml 20%KOH-甲醇溶液,充分搖勻。
         2)片刻后,加入5ml苯,搖勻,再沿試管壁慢慢加入1~1.5ml蒸餾水,輕輕混勻(勿激烈搖蕩),于試管架上靜置分層。若溶液不分層,則用滴管吸取蒸餾水,沿管壁滴加,邊滴加邊搖動,直到溶液開始分層時,靜置。可以看到溶液逐漸分為兩層,下層是稀的乙醇溶液,其中溶有皂化的葉綠素a和b(以及少量的葉黃素);上層是苯溶液,其中溶有黃色的胡蘿卜素和葉黃素。
      4. 吸收光譜的觀察  將上述已分層的試管溶液,用分光鏡觀察兩類色素的吸收光譜,首先讓下層綠色素部分對準進光孔,看光譜有何變化;然后再將上層黃色素溶液對準進光孔,看光譜又有何變化。把觀察的結果用簡單的圖表示出來。
      5. H 和Cu2 對葉綠素分子中Mg2 的取代作用
      方法一:
         1)取兩支試管,*支試管加葉綠體色素提取液2ml,作為對照。第二支試管中加葉綠體色素提取液5ml,再加入5%HCl數滴,搖勻,觀察溶液顏色變化。
         2)當溶液變褐后,再加入少量醋酸銅粉末,微微加熱,觀察記載溶液顏色變化情況,并與對照試管相比較。
      方法二:
      另取醋酸-醋酸銅溶液20ml,以燒杯盛之。取新鮮植物葉片兩片,放入燒杯中,用酒精燈慢慢加熱,隨時觀察并記錄葉片顏色的變化,直至顏色不再變化為止。解釋原因。
      注意事項
      1.在低溫下發生皂化反應的葉綠體色素溶液,易乳化而出現白絮狀物,溶液渾濁,且不分層。可激烈搖勻,放在30~40℃的水浴中加熱,溶液很快分層,絮狀物消失,溶液變得清澈透明。
      2.分離色素用的圓形濾紙,在中心打的小圓孔,周圍必須整齊,否則分離的色素不是一個同心圓。

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