恒遠(yuǎn)生物|人信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5B(STAT5B)ELISA實(shí)驗(yàn)說(shuō)明

檢測(cè)范圍：2.5pg/ml-85pg/ml





使用目的：




本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5B(STAT5B)含量。




實(shí)驗(yàn)原理：




本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5B(STAT5B)水平。用純化的人信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5B(STAT5B)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5B(STAT5B)，再與HRP標(biāo)記的信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5B(STAT5B)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5B(STAT5B)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5B(STAT5B)濃度。




標(biāo)本要求 ：




1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。




2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。




操作步驟：




1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。




80pg/ml5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

40pg/ml4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

20pg/ml3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10pg/ml2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

5pg/ml1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液




2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。




3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  




4.配液：將30倍（48T的20倍）濃縮洗滌液用蒸餾水30倍（48T的20倍）稀釋后備用。




5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。




6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。




7.溫育：操作同3。




8.洗滌：操作同5。




9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。




10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。




測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。




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